RÉSEAU INTERUNIVERSITAIRE POUR LE DÉVELOPPEMENT DE LA FILIÈRE ÉNERGIE SUCRIÈRE
UNIVERSITÉ FÉDÉRALE DE SÃO CARLOS
PROGRAMME D'AMÉLIORATION GÉNÉTIQUE DE LA CANNE À SUCRE
RABOUGRISSEMENT DES REPOUSSES
Analyse du Rabougrissement des Repousses (RSD)
Introduction
Le retard de croissance des repousses (RCR) est causé par la bactérie Leifsonia xyli subsp . xyli . Cette maladie est répandue dans tous les États brésiliens et affecte toutes les variétés. Elle est considérée comme invisible et insidieuse, car elle ne présente aucun symptôme permettant de l'identifier sur le terrain, et son identification correcte n'est possible qu'en laboratoire. Malgré cette difficulté, ses dégâts se manifestent par une baisse de productivité et une réforme précoce des plantations de canne à sucre. Son seul moyen de pénétrer dans une nouvelle zone est la plantation de tiges contaminées, non identifiées auparavant, à partir desquelles elle se propage à d'autres plants par le cueilleur. Les producteurs ne remarquent la maladie que sur les plants adultes déjà établis au champ, lorsqu'il n'y a plus aucune possibilité de la contrôler.
Importance de la maladie :
Il n'existe aucune donnée sur les dégâts causés par la maladie aux variétés brésiliennes actuellement cultivées. Cependant, les résultats de recherches menées dans d'autres pays producteurs de canne à sucre montrent clairement que le retard de croissance des repousses est la principale maladie affectant la culture. Le tableau ci-dessous illustre le déclin de la productivité dans ces pays :
Propagation de la maladie par le moissonneur :
La figure ci-dessous montre que la propagation de la maladie à partir d’une tige contaminée variait de 3,9 à 7,3 mètres lors de la première coupe et de 8,8 à 11,5 m lors de la deuxième coupe.
Objectif des évaluations
Le retard de croissance des repousses de canne à sucre ne peut être contrôlé qu'en plantant des plants exempts de la bactérie. L'identification fiable de la maladie n'étant possible qu'en laboratoire, la réussite d'une plantation de canne à sucre est étroitement liée aux tests diagnostiques effectués sur le matériel de multiplication avant la plantation. Ainsi, la productivité d'une plantation de canne à sucre dépend de l'examen préalable des tiges utilisées pour la plantation.
Recommandations pour le prélèvement d'échantillons à des fins de diagnostic
Chaque échantillon doit comprendre jusqu'à 100 tiges par zone (parcelle, parcelle, section, etc.) pour chaque variété. Les échantillons doivent être prélevés dans des champs de canne à sucre de plus de neuf mois. Bien qu'il n'existe pas de différence connue entre les tiges récoltées au hasard et les tiges fines sélectionnées, il est recommandé d'orienter les échantillons vers les talles suspectées d'être infectées par l'agent pathogène. La bactérie est principalement présente dans la partie basale, plus mature, de la tige, c'est-à-dire dans les premiers nœuds à la base des plantes adultes. Il est recommandé de ne pas utiliser d'instruments coupants pour prélever le matériel. Pour ce faire, il faut casser les cannes à la base. Les tiges percées de trous de forage doivent également être évitées.
Le tableau ci-dessous présente les informations devant accompagner les échantillons. Il est essentiel de renseigner tous les champs (variété, coupe, section/parcelle, traitement thermique effectué ou non et nombre d'échantillons). Ces informations sont extrêmement utiles pour le suivi des zones au fil des ans et pour leur diffusion aux zones voisines.
Tableau 1. Procédure de spécification du matériel envoyé pour diagnostic.
Méthodologie d'extraction de la sève du xylème
Pour extraire le liquide vasculaire de chacune des tiges échantillonnées, les étapes suivantes doivent être suivies correctement :
1. Nettoyez les tiges avec un chiffon humide, en évitant la contamination par des particules de terre et d’autres impuretés ;
2. Entre le deuxième et le troisième entre-nœud, à partir de la base de la tige, effectuez une coupe en biseau à la base et une coupe transversale à la partie supérieure. Les coupes terminales doivent être effectuées sur chaque tige pour extraire ultérieurement la sève du xylème.
3. Un compresseur basse pression est utilisé, avec une tétine en caoutchouc (type trayeuse) fixée à l'extrémité du tuyau pour faciliter la fixation de la tige et l'extraction de la sève. Les tiges récoltées le matin produisent un volume plus important.
Figure 2. Compresseur adapté avec gobelet trayeur en caoutchouc (type machine à traire).
4. Recueillir au moins 0,5 ml de liquide vasculaire de chaque tige échantillonnée dans des microtubes en plastique d’une capacité de 1,5 ml.
4. Recueillir au moins 0,5 ml de liquide vasculaire de chaque tige échantillonnée dans des microtubes en plastique d’une capacité de 1,5 ml.
Figure 3. Conditionnement du liquide vasculaire dans des microtubes de 1,5 ml.
5. Placer du chlorure d'alkyldiméthylbenzylammonium (un produit commercial à base d'ammonium quaternaire) dans chaque microtube afin de préserver l'échantillon. Si le volume de sève de canne à sucre est de 0,5 ml, la quantité de produit commercial pur (contenant 3 % de principe actif) à ajouter à chaque microtube est de deux gouttes. Envoyer le produit dès que possible pour analyse en laboratoire.
Méthodes d'évaluation de la présence de bactéries dans les échantillons
La méthode sérologique est utilisée dans le monde entier pour l'analyse de routine du retard de croissance des repousses. Dans le cadre de cette technique, le dot blot est utilisé dans les analyses LAGEM :
a) Sérologie par dot blot
Grâce à cette méthode, il est possible de déterminer les différents niveaux d’infection :
Ne pas détecter ni nettoyer : moins de 106 cellules bactériennes par mL de sève vasculaire ;
N3 – faible : présence de 107 cellules bactériennes par mL de sève vasculaire ;
N2 - moyen : présence de 10 8 cellules bactériennes par mL de sève vasculaire ;
N1 - élevé : présence de plus de 109 cellules bactériennes par mL de sève vasculaire.
Figure 4. Membrane avec différents niveaux d’infection.
5. Ajouter du Chlorure d’Alkyl Diméthylbenzyl Ammonium (produit commercial ammonium quaternaire) dans chaque microtube pour la préservation de l’échantillon. Si le volume de la sève de canne est de 0,5 ml, la quantité du produit commercial pur (contenant 3 % du principe actif) à ajouter dans chaque microtube est de deux gouttes. Envoyer dès que possible pour analyse en laboratoire.
Méthodes d’évaluation de la présence de la bactérie dans les échantillons
La méthode sérologique est employée dans le monde entier pour l’analyse de routine du rabougrissement des repousses. Dans cette technique, le “dot blot” est celui utilisé dans les analyses du LAGEM :
a) Sérologie “dot blot”
Par cette méthode, il est possible de connaître les différents niveaux d’infection :
• Non détectées ou saines : en dessous de 10⁶ cellules bactériennes par ml de sève vasculaire ;
• N3 – faible : occurrence de 10⁷ cellules bactériennes par ml de sève vasculaire ;
• N2 – moyen : occurrence de 10⁸ cellules bactériennes par ml de sève vasculaire ;
• N1 – élevé : occurrence supérieure à 10⁹ cellules bactériennes par ml de sève vasculaire.
Considérations finales
Cette maladie est la principale de la canne à sucre et l’homme joue un rôle capital dans son apparition. La bactérie ne survit pas dans le sol, ce qui permet qu’un replantage d’une zone contaminée puisse être effectué immédiatement. La bactérie ne s’abrite pas dans les mauvaises herbes présentes dans un champ de canne. Aucun insecte n’est capable de transmettre la maladie. La seule manière pour que le pathogène soit introduit dans une nouvelle zone est par l’action de l’homme en plantant des boutures contaminées. Ensuite, la maladie se propage dans une parcelle par l’intermédiaire des outils agricoles. L’examen diagnostique a pour fonction d’orienter les travaux de futures multiplications de clones ou de variétés, en établissant la réelle nécessité de l’utilisation du traitement thermique pour contrôler le rabougrissement des repousses. Même dans les zones où le niveau d’infection de la canne est faible, lors des futures multiplications, il est nécessaire d’utiliser le traitement thermique et de procéder à la désinfection des moissonneuses et des machettes utilisées pour couper et hacher les boutures, afin d’éviter l’augmentation de l’incidence de la maladie dans la parcelle elle-même ou dans les parcelles voisines.
Les échantillons doivent toujours être envoyés au LAGEM/UFSCar – Araras. Lorsque le nombre d’échantillons est important, il est recommandé de prendre rendez-vous à l’avance !
Remarque
Le LAGEM peut fournir un nombre limité de microtubes et de solution de préservation. Il est conseillé de téléphoner pour vérifier la disponibilité. Les microtubes seront rendus propres et stérilisés après l’analyse, accompagnés des rapports, ou récupérés lors de la livraison du prochain lot d’échantillons.
Équipe
Responsable : Prof. Alfredo Seiiti Urashima (PhD en protection des plantes)
Équipe technique : Nathalia Fadel (Analyste)
Adresse pour l’envoi des échantillons
Universidade Federal de São Carlos
Centre des Sciences Agronomiques
Département de Biotechnologie et Production Végétale et Animale
Rodovia Anhanguera, SP-330, KM 174, CP 153
CEP 13600-970 Araras, SP – Brésil
Tél.: +55 (19) 3543 2656
e-mail: alfredo.urashima@ufscar.br